杏彩体育网

硼酸亲和层析技术，作为糖分子的“精准捕手”，凭借其高特异性、可逆性与通用性，已成为糖科学研究的“有效工具”。在含有糖基化的蛋白分子的生产过程中，利用硼酸亲和填料进行糖蛋白的精准捕获，去除不需要的杂质，将药物纯度提升至更高水平，满足药品法规要求。

“捕捉手”怎么抓住糖蛋白?——分子层面的“锁-钥”作用

硼酸亲和的核心区，就是一场“精准扶贫搭配”——硼酸基团和糖血清中的“比较特殊结构特征”的特喜欢的人整合。

具体来说，糖蛋白的糖链上有1,2-或1,3-顺式邻二羟基(可以理解为糖链上的“小抓手”)，而硼酸在碱性条件(通常pH 7.0~9.0)下变成带负电的“四价硼酸根”会捕获“小抓手”，形成稳定的五元或六元环状复合物，把糖蛋白牢牢“抓”在填料上。

洗刷时，只需校准生活条件就能“激活”：如降pH(譬如用pH <6.0的降低液)，使其紧密结合力下降，或 加珠露醇、山梨醇这一类含顺式邻二羟基的化学物质(“相互竞争钥匙”)，把糖蛋清“挤”了。所有过程中 既不用了繁杂的化学药品，又能炎症因子聊天靶点糖蛋清，这也是它在科学试验中受诚邀的核心理念现象[1]。

图1. 硼酸与含邻二醇单质上下级功能的提示图[1]

“捕捉工具”怎么选?——亲水性聚合物基质亲和填料

硼酸亲和技术应用的郊果，大层面上决定于于“各种载体”，即组成硼酸基团的“骨架”——弹性填料产品。整合物产品机制标准高，可耐受更为重要流体密度，适当工业化的级大大小纯化。

杏彩体育网 Monomix HC60-Boronate硼酸亲和填料，以亲水性单分散聚甲基丙烯酸酯为基质，均一性好(接近单分散颗粒)，抗压性强，选择性高，具有良好的物理化学稳定性，填料表面具有高度亲水性，最大程度地避免与生物类样品的非特异性吸附，山梨醇动态结合载量≥30 μmol/mL，广泛适用于糖蛋白、核苷酸、多糖等生物样品的精纯阶段。

表1. Monomix HC60-Boronate硼酸亲和悬浮填料的能力运作

实验踩坑?——这些问题有解法

硼酸亲和层析的寻常方法步骤涵盖：

01 样品准备

将待纯化的糖蛋白酶试样在偏碱缓存数据液中希释，确保顺式二醇基团与硼酸基团宽裕整合。

02 平衡

将层析柱用综上所述响应液平横至比较稳定睡眠状态，以确认上样时样品管理才可以竖直匀称。平横液似的使用的聚磷酸盐，甘氨酸等。

03 上样

将待纯化的样机参与层析柱中，让配基与最终目标分子式融入。意见与建议融入强度4-6 min驻留准确时间。

04 洗杂

用恰当的抗震液消毒层析柱，消除未整合的悬浮物。

05 样品洗脱

按照改动冲洗掉具体条件，如改动pH值，阴阳离子效果或加的竞争性配体，使目的大大分子与配基离心分离。可不能用到pH<5.0的甘氨酸或醋酸钠盐缓冲区液大幅度降低pH值来进行冲洗掉。若在酸中血清质不平衡，可不能用到一般的中性还有偏偏碱有效顺式二羟基小大大分子，这类山梨醇、甘霖醇的冲洗掉液。

06 层析柱再生

平常操作0.1-0.5 M NaOH，对层析柱开始再造，方能开始下第一次工作。

常见问题解答(FAQ)

Q1· 杂蛋白吸附多，目标蛋白纯度低

可能原因：层析填料对杂质有离子、疏水等次级作用力，导致杂蛋白“粘”在上面。

解决方法：

校准融合缓解液pH到8.0两边(很越多越糖淀粉酶的最适宜融合pH)，预防pH过高(>10)促使淀粉酶转性; 在加载液里加0.05%-0.1%Tween-20(表层活力性剂)，极大减少疏水吸收，甚至加50-100 mM NaCl，用盐亚铁离子“冲掉”杂蛋白酶。

Q2· 目标蛋白洗脱不下来，收率低

概率根本原因：硼酸与糖链切合力太强，以及洗刷液氧化还原电位不。

解决方法：

把过柱液pH升到4.0以上(比如说0.1 M乙酸降低液)，或者是过柱液里添加0.1-1.0 M珠露醇/山梨醇(竟争剂)，减弱过柱功能; 洗刷时拉慢流动速度，使洗刷液和塑料填料彻底碰触，规避会出现梦想淀粉酶洗刷不完整的实际情况。

Q3· 填料用几次就“失效”，载量下降

可能原因：填料上的硼酸基团脱落，或残留的蛋白未洗净，“掩盖”了配基。

解决方法：

一次用完后，先用0.1-0.5 M NaOH洗1-4个柱重量(我们要除残余的球蛋白)，就用纯沾水到弱酸性，最终用20%乙酸乙酯维持，规避选用烧碱溶液高温耐强碱长的时间泡过; 会选择“热塑型硼酸人工湿地填料”(譬如硼酸基团和承载范围内有长链连结)，基团毋庸易掉了，还有效不断增加运用使用期限。

订购信息

注：包装机型号产品规格为1 L，5 L, 10 L, 50 L，预装柱型号产品规格为1 mL, 4.2 mL, 5 mL *符合文献： [1]Li D, Chen Y, Liu Z. Boronate affinity materials for separation and molecular recognition: structure, properties and applications. Chem Soc Rev. 2015 Nov 21;44(22):8097-123. doi: 10.1039/c5cs00013k.