Nanofilm SEC

　　Nanofilm体积计算排阻（SEC）紧固相是以高色度极具着优质机诫比较经济性分析的热熔胶为栽培基质，表面能化学物质键合很多层均一、亲水、微米板厚的普通聚合反应物溥膜。该紧固相的这个结构特征是可以让用低盐浓度值，或含有机会溶液的储存液是流量相去生物工程样本的剥离，并极具着高的判别率和样本出售率。该色谱鲍尔环填料为窄颗粒物直径分布图的圆形热熔胶颗粒物。口径要求有150、250、450和950Å。

产品特点

高的分辨率和分离效率
在高浓度盐溶液中非常稳定
高的重复性
可在低浓度盐溶液中进行蛋白的分离
高的蛋白回收率，并可保持其生物活性
pH适用范围2-9

高效分离

　　面对动物溶合来讲，动物团伙与活性炭过滤器相护的非炎症因子聊天相护用处一般会会造成低的溶合的吸收率，如色谱峰拖尾和低的收回率等。Nanofilm SEC活性炭过滤器所采取的特色的外面生物技术学水平能够在热熔胶外面共价键合两层平滑的汇聚物链。这个紧固相具碱式盐和亲水的的性质，为此能够最多最大消掉活性炭过滤器产品与动物团伙，当中尤其要是与蛋白酶相护的非炎症因子聊天相护用处。这个特别的装修设计的涂膜能够使Nanofilm SEC柱有高的辩认率和溶合的吸收率。如，以尿嘧啶身为测量物能够有高至每米90,000的概念塔板数（见表1）。

表1 Nanofilm SEC柱的柱效，以尿嘧啶为待测物（0.1M磷酸盐缓冲液，pH7.0）

Nanofilm SEC-150	>90,000 塔板/米
Nanofilm SEC-250	>90,000 塔板/米
Nanofilm SEC-500	>85,000 塔板/米
Nanofilm SEC-1000	>85,000 塔板/米

标准蛋白分离

　　赛分Nanofilm SEC柱便捷能分離的一号个好例子见图1。两类球膳食纤维，甲状腺球球蛋清、BSA二聚体、BSA和溶菌酶，或某种多肽在Nanofilm SEC柱上受到了满意率的分離。以溶菌酶计受到的系统理论塔板数高至30,000/m，故此溶菌酶中的某种残渣都行以受到比较好的分離，而这样的分離效用常常情况下仅有在便捷能孔状管电泳中才看受到。SEC柱的标淮测式仪产品的产品的样品常常情况下为Biorad 标淮球蛋清（甲状腺球球蛋清、免疫力球球蛋清G 、卵清球蛋清、肌球素）。他们球膳食纤维的pI均超过7.5，故此在pH=7.0时不能暗含显然的正正电荷量。但相对高度带正正电荷量的球膳食纤维，如溶菌酶（pI 11.0）、细胞核色素沉着（pI 10.6）、抑肽酶（pI 11.0）却极易与人工湿地填料表面上的残存硅羟基时有发生强静电能能够效用不足以常难被洗刷。Nanofilm SEC柱不存有的这是现象。而，赛分企业实现了他们的球蛋清测式仪标淮产品的产品的样品，进来就涉及了对微生物分離机械性能是敏感度的溶菌酶。

图1 在4.6mm I.D.×250mm Nanofilm SEC-150柱上分离4种蛋白和一个多肽。

BSA与BSA二聚体的分离

从图2可以看到，Nanofilm SEC-250柱（4.6mm I.D.×300mm），可以获得牛血清白蛋白（BSA）和BSA双聚体的分离，其中流动相为150mM的磷酸盐缓冲液（pH 7.0）。

甲状腺球蛋白中聚合体的分离

　　甲状腺球淀粉酶是一种个大原子量淀粉酶（MW 670,000）。货品化的甲状腺球淀粉酶含配位整合体钙镁离子，也许是双聚体或四聚体。从图3可能看过，Nanofilm SEC-500可能对甲状腺球淀粉酶和甲状腺球淀粉酶配位整合体建立基线溶合。

图3 用Nanofilm SEC-500柱（5µm, 4.6mm I.D.×300mm）从甲状腺球蛋白中分离出聚合体。

流失相：150mM磷酸盐缓冲液，pH 7.0

风速：0.35mL/min

的检测吸光度：UV 214nm

工作温度：室温（23°C）

进样容积：5µL

血清打样定制：（1）聚合体；（2）甲状腺球蛋白（1.0mg/mL），670kD

孔结构对分离的影响

　　SEC填充料孔的直径的程度在淀粉酶酶转移中起着至关关键的用处。对於在某一些相应大原子量範圍内占比的淀粉酶酶试品如何理解，Nanofilm SEC固定好相样式的采用应该应用场景填充料的去掉极限法和规则化大原子量範圍这多个因素。

Nanofilm填料	蛋白的分子量排除极限
SEC-150	750,000
SEC-250	1,250,000
SEC-500	2,500,000
SEC-1000	5,000,000

图4 Nanofilm SEC-150、Nanofilm SEC-250和Nanofilm SEC-500柱（5µm, 7.8mm I.D.×300mm）分离效果的比较。

外溢相：150mM磷酸盐缓冲液，pH 7.0

风速：0.25mL/min

查测光的波长：UV 280nm

温湿度：室温（23°C）

进样质量分数：5µL

打样定制：（1）甲状腺球蛋白（1.0mg/mL）， 670kD；（2）BSA （1.0mg/mL），66kD；（3）核糖核酸酶A（1.0mg/mL），13.7kD；（4）尿嘧啶（2.5mg/mL），120 D

图4为享有的有差异内径的Nanofilm SEC柱对团伙量在120-670,000左右分布不均的3种蛋白酶的破乳，从里面应该看到了Nanofilm SEC骨料内径的的有差异对破乳的会影响。

高的蛋白回收率及蛋白活性的保持

　　Nanofilm SEC骨料是在硅橡胶制品表明明显可能地共价键合一点亲水的碱式盐聚酯薄膜。淀粉酶质或以外的别的生物工程学团伙与一种骨料的双方效果极为小。由此，淀粉酶质在硅橡胶制品表明的吸咐都会被抑止，这就保证质量了高的收回利用率，并能令淀粉酶质在剥离后会已然拥有高的生物工程学亲水性。表2是實驗测定的偏酸淀粉酶质BSA和酸碱度淀粉酶质溶菌酶的收回利用率数据表格。

表2 蛋白在Nanofilm SEC柱上的回收率（色谱柱规格4.6mm I.D.×250mm，流动相为0.15M磷酸盐缓冲液，pH 7.0）

固定相	蛋白回收率%
Nanofilm SEC-150	BSA	>95%
Nanofilm SEC-150	溶菌酶	>90%
Nanofilm SEC-250	BSA	>95%
Nanofilm SEC-250	溶菌酶	>90%
Nanofilm SEC-500	BSA	>95%
Nanofilm SEC-500	溶菌酶	>95%
Nanofilm SEC-1000	BSA	>95%
Nanofilm SEC-1000	溶菌酶	>95%

Nanofilm SEC固定相的高稳定性

　　Nanofilm SEC调整不变相含有紧密的纳米涂层键合强度，所以说可阻挡符合各种分子结构结构摧毁透明硅胶与调整不变相相互间的键合，而使切实保障悬浮填料含有高的安全性。Nanofilm SEC调整不变相常用于多重缓解液中，如冰醋酸铵、磷酸、Tris等。当用150和100mM的磷酸缓解液（pH7.0）看做流量相时，在3个月大或进样1000次后Nanofilm SEC柱的机械性能仅会再次发生轻的修改，调取耗时的偏离在5%三岁。图5是Nanofilm SEC-150在1、5和10天，每天晚上运动10小得见的可是。从图里是可不能够听到泄露曲线方程核心偏移。图6是三周内核蛋白和其中一个小分子结构结构在500倍柱体积太内调取耗时的发生变幻前提。从图里是可不能够听到调取耗时发生变幻的差异化极其小。 Nanofilm SEC调整不变相可在高盐氧浓度，如1.0M下便用。还有就是，Nanofilm SEC柱在生物碳饱和溶液如甲醇、甲醇、THF、DMF、DMSO等中，与其与水的混和饱和溶液中也一定安全。 Nanofilm SEC柱在pH 2-8.5时光范围内安全。还有就是，在短耗时内也是可不能够受性高的pH，如pH 8.5-10。 Nanofilm SEC柱在高温受性几个方面展示凸显。最低工作的高温相当于到80°C。

图5 Nanofilm SEC固定相稳定性实验结果

液相色谱柱：Nanofilm SEC-150（5µm, 4.6mm I.D.×300mm）

外流相：150mM和100mM磷酸盐缓冲液, pH 7.0

流动速度：0.35mL/min

温湿度：室温

进样质量：10µL

样件：1. 甲状腺球蛋白（1.0mg/mL）；2. BSA （1.0mg/mL）；3. 核糖核酸酶A（1.0mg/mL）；4. 尿嘧啶（50mg/mL）。每天运行10小时

图6 三种蛋白和尿嘧啶在500倍柱体积内反复进样得到的保留时间的变化情况。测试条件同上图。

蛋白分子量的校正

　　相对SEC来讲，活性炭过滤器管径的强弱决心了所都可以剥离的团伙结构式量依据之内，而孔大小则决心了剥离数量。Nanofilm活性炭过滤器享用4种管径年纪，都可以网络覆盖一款宽依据之内团伙结构式量分布图制作的生物工程大团伙结构式。图7是Nanofilm SEC-150、Nanofilm SEC-250和Nanofilm SEC-500的核蛋白团伙结构式量校核弧度。

图7 Nanofilm SEC固定相稳定性实验结果

液相色谱柱：4.6mm I.D.´300mm, 填料粒径为5µm

传递相：150mM磷酸盐缓冲液, pH 7.0

空气流速：0.25mL/min

探测光波长：214nm

进样质量：5µL

样品英文：1. 甲状腺球状蛋白（670kD）, 2. IgG（150kD）, 3. BSA双聚体（132kD）, 4. BSA （66kD）, 5. 卵清蛋白（44kD）, 6. 肌红蛋白（17.6kD）, 7. 溶菌酶（14.3kD）, 8. B12 （1.35kD）, 9. 尿嘧啶（120D）

另外一只种广泛性使用的的定性分析SEC进行调整相的做法是以核血清的原子量对扩撒公式（Kd）作图。Kd按过式定议： Kd = （Ve-Vo）/（VT-Vo）在其中Ve、VT和Vo分別是原辅料冲洗掉表面积，离子交换柱的总表面积和柱的死表面积。核血清原子量和Kd的平滑区域一般会被做SEC进行调整相进行的分类。右图8下图，Nanofilm SEC-150在一名宽的原子量超范围内原子量和Kd之中都有积极的平滑内在联系。

图8 Nanofilm SEC-150的蛋白分子量校正曲线

气相色谱柱：Nanofilm SEC-150 （4.6mm I.D.×150mm, 5µm）

流相：100mM磷酸缓冲液，pH 7.0

流体密度：0.25mL/min

测试光波长：UV 214nm

水温：室温（23°C）

进样体积大概：5µL

合格品：（1）甲状腺球蛋白（670KD）；（2） IgG（150KD）；（3）BSA双聚体（132KD）；（4 ）BSA（66KD）；（5）卵清蛋白（44KD）；（6）a-胰凝乳蛋白酶（25KD）；（7）肌红蛋白（17.6kD）；（8）溶菌酶（14.3kD）；（9）多肽样品（1.5kD）；（10）尿嘧啶（120D）

低盐浓度下蛋白的分离

　　相对于带正电势血清的离心剥离，恰恰必须要用高盐酸度值值来下降硅胶材料制品机质与血清中的强如何消除静电彼此之间能力。假如组织色斑沉积C一种所含正电势的血清质（pI=9.6），从而不易在低盐酸度值值（假如50mM聚聚磷酸盐响应液， pH 7.0）下被洗刷出。运用高盐酸度值值洗刷会禁止SEC柱在血清离心剥离中的应用范围。赛分支机构的所搭建的Nanofilm SEC柱就能够极好地离心剥离带正电势的血清质。如图已知9已知，分为Nanofilm SEC-500柱，组织色斑沉积C就能够在50mM聚聚磷酸盐响应液（pH 7.0）中拥有极好的离心剥离，而这类离心剥离成效是两种硅胶材料制品机质SEC柱所没有办法进行的。Nanofilm SEC柱的出現为SEC开发新了有很多新的应用范围范围，比如离心剥离对盐强烈的生物学原子，血清彼此之间能力的研究分析，还有LC/MS探测等。

图9 细胞色素C在不同磷酸盐缓冲液（pH 7.0）中的流出曲线

离子交换柱：Nanofilm SEC-250柱（5µm, 4.6mm I.D.×300mm）

空气流速：0.35mL/min

检查光谱：UV 214nm

摄氏度：室温（23°C）

进样空间：5µL

土样溶液浓度：1.0mg/mL

SRT SEC和Nanofilm SEC的比较

　　与Nanofilm SEC想必，SRT SEC具备更高有一些的剥离电容量和辩认率，可供考虑的直径样式都要比两者多。只不过，Nanofilm SEC在有一些软件，如用到低盐氧化还原电位或含可溶解性盐的充分相转移催化剂做流chan相实行中含正带电粒子生物工程学碳原子的剥离，多维色谱剥离，和LC/MS等中行为得会比较稳定的，而这个是过去SEC紧固好相所不了改变的。还有就是，SRT和Nanofilm SEC紧固好相也具备不一样的的考虑性。SRT和Nanofilm SEC紧固好相就能够搭配组合了用到，最后可以给生物工程学碳原子，水阴离子型合成树脂物，病毒样本和病菌，和nm科粒等的剥离给出一种齐全的剥离设计方案。

不同规格Nanfilm SEC固定相的特征参数

固定相	Nanofilm SEC-150	Nanofilm SEC-250	Nanofilm SEC-500	Nanofilm SEC-1000
材料	纳米亲水键合薄膜	纳米亲水键合薄膜	纳米亲水键合薄膜	纳米亲水键合薄膜
粒径	5、10µm	5、10µm	5、10µm	5、10µm
孔径（Å）	~ 150	~ 250	~ 450	~ 950
蛋白分子量范围	200 - 750,000	1,500 - 1,250,000	15,000 - 2,500,000	50,000 - 5,000,000
pH稳定性	2 - 8.5 （pH 9.0 下可以短暂使用）	2 - 8.5 （pH 9.0 下可以短暂使用）	2 - 8.5 （pH 9.0 下可以短暂使用）	2 - 8.5 （pH 9.0 下可以短暂使用）
反压（psi, 以4.6mm I.D.×300mm计）	~ 700	~ 700	~ 750	~ 750
耐受压力（psi）	~ 3,500	~3,500	~ 3,000	~ 3,000
盐浓度范围	20mM - 2.0M	20mM - 2.0M	20mM - 2.0M	20mM - 2.0M
耐受温度（°C）	~ 80	~ 80	~ 80	~ 80

性能特点

订购信息

Nanofilm SEC-150分析柱

长度x内径	粒径 (µm)	孔径 (Å)	订货号
50mm x 4.6mm （保护柱）	5	150	201150-4605
150mm x 4.6mm 250mm x 4.6mm 300mm x 4.6mm	5 5 5	150 150 150	201150-4615 201150-4625 201150-4630
50mm x 7.8mm （保护柱）	5	150	201150-7805
150mm x 7.8mm 250mm x 7.8mm 300mm x 7.8mm	5 5 5	150 150 150	201150-7815 201150-7825 201150-7830
50mm x 4.6mm（保护柱）	10	150	203150-4605
300mm x 4.6mm	10	150	203150-4630
50mm x 7.8mm（保护柱）	10	150	203150-7805
300mm x 7.8mm	10	150	203150-7830

Nanofilm SEC-250分析柱

长度x内径	粒径 (µm)	孔径 (Å)	订货号
50mm x 4.6mm（保护柱）	5	250	201250-4605
150mm x 4.6mm 250mm x 4.6mm 300mm x 4.6mm	5 5 5	250 250 250	201250-4615 201250-4625 201250-4630
50mm x 7.8mm（保护柱）	5	250	201250-7805
150mm x 7.8mm 250mm x 7.8mm 300mm x 7.8mm	5 5 5	250 250 250	201250-7815 201250-7825 201250-7830
50mm x 4.6mm（保护柱）	10	250	203250-4605
300mm x 4.6mm	10	250	203250-4630
50mm x 7.8mm（保护柱）	10	250	203250-7805
300mm x 7.8mm	10	250	203250-7830

Nanofilm SEC-500分析柱

长度x内径	粒径 (µm)	孔径 (Å)	订货号
50mm x 4.6mm（保护柱）	5	450	201500-4605
150mm x 4.6mm 250mm x 4.6mm 300mm x 4.6mm	5 5 5	450 450 450	201500-4615 201500-4625 201500-4630
50mm x 7.8mm（保护柱）	5	450	201500-7805
150mm x 7.8mm 250mm x 7.8mm 300mm x 7.8mm	5 5 5	450 450 450	201500-7815 201500-7825 201500-7830
50mm x 4.6mm（保护柱）	10	450	203500-4605
300mm x 4.6mm	10	450	203500-4630
50mm x 7.8mm（保护柱）	10	450	203500-7805
300mm x 7.8mm	10	450	203500-7830

Nanofilm SEC-1000分析柱

长度x内径	粒径 (µm)	孔径 (Å)	订货号
50mm x 4.6mm（保护柱）	5	950	201950-4605
150mm x 4.6mm 250mm x 4.6mm 300mm x 4.6mm	5 5 5	950 950 950	201950-4615 201950-4625 201950-4630
50mm x 7.8mm（保护柱）	5	950	201950-7805
150mm x 7.8mm 250mm x 7.8mm 300mm x 7.8mm	5 5 5	950 950 950	201950-7815 201950-7825 201950-7830
50mm x 4.6mm（保护柱）	10	950	203950-4605
300mm x 4.6mm	10	950	203950-4630
50mm x 7.8mm（保护柱）	10	950	203950-7805
300mm x 7.8mm	10	950	203950-7830

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