Nanofilm SEC

　　Nanofilm球体积排阻（SEC）紧固的相是以高纯净度都具备着良好的机平稳性的热熔胶为基本材料，外层耐腐蚀键合一斜层均一、亲水、纳米技术层厚的碱性缔合物膜。该紧固的相的这个显著特点是能让用低盐溶液浓度，或含有机肥料容剂的缓存液作外流相进行微生物印刷品管理的溶合，并都具备着高的粪便率和印刷品管理收购率。该色谱生物填料为窄顆粒直径分布点的圆形热熔胶顆粒。管径规格尺寸有150、250、450和950Å。

产品特点

高的分辨率和分离效率
在高浓度盐溶液中非常稳定
高的重复性
可在低浓度盐溶液中进行蛋白的分离
高的蛋白回收率，并可保持其生物活性
pH适用范围2-9

高效分离

　　我们对海洋动物分开一般来说，海洋动物分子结构式与悬浮生态学生态学填料中间的非特女性朋友互为左右使用虽然会促使低的分开生产率，如色谱峰拖尾与低的回收并率等。Nanofilm SEC悬浮生态学生态学填料所利用的独具特色的接触面化学物质枝术就还都不错在矽胶接触面共价键合一份不均的聚合反应物链。一些调整相具有着弱酸性和亲水的成分，因而就还都不错较大容许解决悬浮生态学生态学填料产品与海洋动物分子结构式，当中更是要格外重视是与蛋清中间的非特女性朋友互为左右使用。一些所经很大设置的涂膜就还都不错使Nanofilm SEC柱拥有高的分别率和分开生产率。比如，以尿嘧啶身为各种测试物就还都不错拥有可高达每米90,000的按理来说塔板数（见表1）。

表1 Nanofilm SEC柱的柱效，以尿嘧啶为待测物（0.1M磷酸盐缓冲液，pH7.0）

Nanofilm SEC-150	>90,000 塔板/米
Nanofilm SEC-250	>90,000 塔板/米
Nanofilm SEC-500	>85,000 塔板/米
Nanofilm SEC-1000	>85,000 塔板/米

标准蛋白分离

　　赛分Nanofilm SEC柱便捷剥离的第有一个个典例见图1。三种血清质，甲状腺球血清、BSA二聚体、BSA和溶菌酶，甚至有是一种多肽在Nanofilm SEC柱上获得了贴心的剥离。以溶菌酶计获得的理论与实践塔板数高至30,000/m，如此溶菌酶中的有是一种溶物也应该以获得相对不错的剥离，而这样的剥离治疗效果一般来说不过在便捷孔隙管电泳中才看获得。SEC柱的原则测评样板一般来说为Biorad 原则血清（甲状腺球血清、免疫力球血清G 、卵清血清、肌球素）。此血清质的pI均不大于7.5，如此在pH=7.0时不可能帶有特别的正自由带电粒子。所以超高带正自由带电粒子的血清质，如溶菌酶（pI 11.0）、神经元天然色素（pI 10.6）、抑肽酶（pI 11.0）却相对容易与填充料外表的多余硅羟基的发生强静电感应相互之间目的不以常难被洗刷。Nanofilm SEC柱不都存在此故障。所以，赛分企业确立了自家的血清测评原则样板，之中就以及了对生物体剥离特性相对神经敏感的溶菌酶。

图1 在4.6mm I.D.×250mm Nanofilm SEC-150柱上分离4种蛋白和一个多肽。

BSA与BSA二聚体的分离

从图2可以看到，Nanofilm SEC-250柱（4.6mm I.D.×300mm），可以获得牛血清白蛋白（BSA）和BSA双聚体的分离，其中流动相为150mM的磷酸盐缓冲液（pH 7.0）。

甲状腺球蛋白中聚合体的分离

　　甲状腺球血清就是个大原子核量血清（MW 670,000）。淘宝宝贝化的甲状腺球血清所含缔合体沉淀物，能够是双聚体或四聚体。从图3能够看清楚，Nanofilm SEC-500能够对甲状腺球血清和甲状腺球血清缔合体构建基线分离法。

图3 用Nanofilm SEC-500柱（5µm, 4.6mm I.D.×300mm）从甲状腺球蛋白中分离出聚合体。

分子运动相：150mM磷酸盐缓冲液，pH 7.0

流动速度：0.35mL/min

检测工具主波长：UV 214nm

湿度：室温（23°C）

进样质量分数：5µL

蛋白质试样：（1）聚合体；（2）甲状腺球蛋白（1.0mg/mL），670kD

孔结构对分离的影响

　　SEC塑料生物填料外径的深浅在核核蛋白分离处理中实现至关首要的的功效。对于那些在相应不同大团伙量标准内分布图的核核蛋白样板认为，Nanofilm SEC固定不变相型号的挑选要求立于塑料生物填料的除掉上限和线性网络大团伙量标准这二个性能参数。

Nanofilm填料	蛋白的分子量排除极限
SEC-150	750,000
SEC-250	1,250,000
SEC-500	2,500,000
SEC-1000	5,000,000

图4 Nanofilm SEC-150、Nanofilm SEC-250和Nanofilm SEC-500柱（5µm, 7.8mm I.D.×300mm）分离效果的比较。

流量相：150mM磷酸盐缓冲液，pH 7.0

风速：0.25mL/min

在线检测激发光谱：UV 280nm

热度：室温（23°C）

进样量：5µL

样本：（1）甲状腺球蛋白（1.0mg/mL）， 670kD；（2）BSA （1.0mg/mL），66kD；（3）核糖核酸酶A（1.0mg/mL），13.7kD；（4）尿嘧啶（2.5mg/mL），120 D

图4为还具有不一样内径的Nanofilm SEC柱对大分子量在120-670,000范围内分布范围的两种球蛋白的分離，一文能否得到Nanofilm SEC生物填料内径的不一样对分離的应响。

高的蛋白回收率及蛋白活性的保持

　　Nanofilm SEC填充料是在蛙胶外观比较大程度地共价键合一半亲水的偏碱性膜。淀粉酶或其它的生物工程体团伙与这填充料的彼此用处无比小。那么，淀粉酶在蛙胶外观的粘附也会被限制，这就做到了高的环保再生资源回收公司率，并能令淀粉酶在剥离，我依然各有高的生物工程体催化活性。表2是实验所测是的咸性淀粉酶BSA和偏碱性淀粉酶溶菌酶的环保再生资源回收公司率参数。

表2 蛋白在Nanofilm SEC柱上的回收率（色谱柱规格4.6mm I.D.×250mm，流动相为0.15M磷酸盐缓冲液，pH 7.0）

固定相	蛋白回收率%
Nanofilm SEC-150	BSA	>95%
Nanofilm SEC-150	溶菌酶	>90%
Nanofilm SEC-250	BSA	>95%
Nanofilm SEC-250	溶菌酶	>90%
Nanofilm SEC-500	BSA	>95%
Nanofilm SEC-500	溶菌酶	>95%
Nanofilm SEC-1000	BSA	>95%
Nanofilm SEC-1000	溶菌酶	>95%

Nanofilm SEC固定相的高稳定性

　　Nanofilm SEC保持固定相都有低密度的铝层键合密度，对此可拒接同时分子结构结构毁掉硅胶材料与保持固定相互相的键合，最后能保证塑料填料都有高的保持稳判定。Nanofilm SEC保持固定相都能够于多类储存液中，如醋酸钠铵、磷酸、Tris等。当用150和100mM的磷酸储存液（pH7.0）算作分子结构运动相时，在3八个月或进样1000次后Nanofilm SEC柱的能仅会发生的轻微的的修改，补齐日子的测量误差在5%左右。图5是Nanofilm SEC-150在1、5和10天，日常作业10小时内的的可是。从图下能够就能够看得见淌出身材曲线基本的相交。图6是两个星期内蛋清和同一个小分子结构结构在500倍柱密度内补齐日子的變化症状。从图下能够就能够看得见补齐日子變化的差异化异常小。 Nanofilm SEC保持固定相可在高盐氧化还原电位，如1.0M下便用。与此同时，Nanofilm SEC柱在有机酸高沸点溶剂如甲醇、酒精、THF、DMF、DMSO等中，与其与水的混和饱和溶液中也相对保持固定。 Nanofilm SEC柱在pH 2-8.5标准内保持固定。与此同时，在短日子内也能够受性高的pH，如pH 8.5-10。 Nanofilm SEC柱在气温受性工作中方面主要表现出色。较高工作中气温多达到80°C。

图5 Nanofilm SEC固定相稳定性实验结果

离子交换柱：Nanofilm SEC-150（5µm, 4.6mm I.D.×300mm）

的流动相：150mM和100mM磷酸盐缓冲液, pH 7.0

空气流速：0.35mL/min

气温：室温

进样质量分数：10µL

备样：1. 甲状腺球蛋白（1.0mg/mL）；2. BSA （1.0mg/mL）；3. 核糖核酸酶A（1.0mg/mL）；4. 尿嘧啶（50mg/mL）。每天运行10小时

图6 三种蛋白和尿嘧啶在500倍柱体积内反复进样得到的保留时间的变化情况。测试条件同上图。

蛋白分子量的校正

　　在SEC所说，鲍尔环人工湿地填料粒径的面积直接取决于了能够分开出来的原子量空间之内，而孔质量分数则直接取决于了分开出来储存量。Nanofilm鲍尔环人工湿地填料成为4种粒径金桥铜业跨接线的截面积大小，应该覆盖率一宽空间之内原子量规划的生物工程大原子。图7是Nanofilm SEC-150、Nanofilm SEC-250和Nanofilm SEC-500的核蛋白原子量较准直线。

图7 Nanofilm SEC固定相稳定性实验结果

气相色谱柱：4.6mm I.D.´300mm, 填料粒径为5µm

流量相：150mM磷酸盐缓冲液, pH 7.0

水流量：0.25mL/min

检验可见光波长：214nm

进样体积大小：5µL

产品的样品：1. 甲状腺球状蛋白（670kD）, 2. IgG（150kD）, 3. BSA双聚体（132kD）, 4. BSA （66kD）, 5. 卵清蛋白（44kD）, 6. 肌红蛋白（17.6kD）, 7. 溶菌酶（14.3kD）, 8. B12 （1.35kD）, 9. 尿嘧啶（120D）

别的种宽泛使用的的研究做法SEC规定不变相的做法是以蛋白质酶的大团伙量对发展比率（Kd）作图。Kd按过式理解： Kd = （Ve-Vo）/（VT-Vo）在当中Ve、VT和Vo各是仿品洗刷表面积，离子交换柱的总表面积和柱的死表面积。蛋白质酶大团伙量和Kd的平滑区段经常性会被做SEC规定不变相考虑的基准。如8如图，Nanofilm SEC-150在是一个宽的大团伙量范畴内大团伙量和Kd内存在稳定的平滑联系。

图8 Nanofilm SEC-150的蛋白分子量校正曲线

离子交换柱：Nanofilm SEC-150 （4.6mm I.D.×150mm, 5µm）

流失相：100mM磷酸缓冲液，pH 7.0

气速：0.25mL/min

检验光波波长：UV 214nm

工作温度：室温（23°C）

进样体型大小：5µL

供试品：（1）甲状腺球蛋白（670KD）；（2） IgG（150KD）；（3）BSA双聚体（132KD）；（4 ）BSA（66KD）；（5）卵清蛋白（44KD）；（6）a-胰凝乳蛋白酶（25KD）；（7）肌红蛋白（17.6kD）；（8）溶菌酶（14.3kD）；（9）多肽样品（1.5kD）；（10）尿嘧啶（120D）

低盐浓度下蛋白的分离

　　针对于带正自由电势血清的分離，并不需用高盐含量来削弱蛙胶栽培产品与血清两者的强电磁干扰互为用处。像是内部色素沉积沉淀C是一个种包含正自由电势的血清质（pI=9.6），所以说没法在低盐含量（像是50mM磷酸二氢钠储存液， pH 7.0）下被过柱完成。动用高盐含量过柱会被限SEC柱在血清分離中的运用。赛分单位所规划设计的Nanofilm SEC柱能能有效率地分離带正自由电势的血清质。如下图图甲中9图甲中，用于Nanofilm SEC-500柱，内部色素沉积沉淀C能能在50mM磷酸二氢钠储存液（pH 7.0）中能够得到非常好的分離，而这一分離效应是各种蛙胶栽培产品SEC柱所無法推动的。Nanofilm SEC柱的发生为SEC开发了无数新的运用方向，举例说明分離对盐的敏感的生态学大分子，血清互为用处的深入分析，与LC/MS判断等。

图9 细胞色素C在不同磷酸盐缓冲液（pH 7.0）中的流出曲线

离子交换柱：Nanofilm SEC-250柱（5µm, 4.6mm I.D.×300mm）

风速：0.35mL/min

检则可见光波长：UV 214nm

温度表：室温（23°C）

进样体积计算：5µL

土样密度：1.0mg/mL

SRT SEC和Nanofilm SEC的比较

　　与Nanofilm SEC对比，SRT SEC兼备更高某些的拆分用量和辩认率，可供确定的管径产品规格也是要比前面多。不过，Nanofilm SEC在某些用，如用低盐氧浓度或含可释放性盐的无机溶液最为流动性相来所含正正电荷海洋生物制品原子核结构的拆分，多维色谱拆分，或LC/MS等中表面得更是为不稳定性，而这就是老式SEC统一相所是无法变现的。还，SRT和Nanofilm SEC统一相也兼备差异的确定性。SRT和Nanofilm SEC统一相还可以搭配组合的时候用，因而即为海洋生物制品原子核结构，水可溶性汇聚物，hiv病毒和细菌和病毒，或微米颗粒状等的拆分出具一名完全的拆分方法。

不同规格Nanfilm SEC固定相的特征参数

固定相	Nanofilm SEC-150	Nanofilm SEC-250	Nanofilm SEC-500	Nanofilm SEC-1000
材料	纳米亲水键合薄膜	纳米亲水键合薄膜	纳米亲水键合薄膜	纳米亲水键合薄膜
粒径	5、10µm	5、10µm	5、10µm	5、10µm
孔径（Å）	~ 150	~ 250	~ 450	~ 950
蛋白分子量范围	200 - 750,000	1,500 - 1,250,000	15,000 - 2,500,000	50,000 - 5,000,000
pH稳定性	2 - 8.5 （pH 9.0 下可以短暂使用）	2 - 8.5 （pH 9.0 下可以短暂使用）	2 - 8.5 （pH 9.0 下可以短暂使用）	2 - 8.5 （pH 9.0 下可以短暂使用）
反压（psi, 以4.6mm I.D.×300mm计）	~ 700	~ 700	~ 750	~ 750
耐受压力（psi）	~ 3,500	~3,500	~ 3,000	~ 3,000
盐浓度范围	20mM - 2.0M	20mM - 2.0M	20mM - 2.0M	20mM - 2.0M
耐受温度（°C）	~ 80	~ 80	~ 80	~ 80

性能特点

订购信息

Nanofilm SEC-150分析柱

长度x内径	粒径 (µm)	孔径 (Å)	订货号
50mm x 4.6mm （保护柱）	5	150	201150-4605
150mm x 4.6mm 250mm x 4.6mm 300mm x 4.6mm	5 5 5	150 150 150	201150-4615 201150-4625 201150-4630
50mm x 7.8mm （保护柱）	5	150	201150-7805
150mm x 7.8mm 250mm x 7.8mm 300mm x 7.8mm	5 5 5	150 150 150	201150-7815 201150-7825 201150-7830
50mm x 4.6mm（保护柱）	10	150	203150-4605
300mm x 4.6mm	10	150	203150-4630
50mm x 7.8mm（保护柱）	10	150	203150-7805
300mm x 7.8mm	10	150	203150-7830

Nanofilm SEC-250分析柱

长度x内径	粒径 (µm)	孔径 (Å)	订货号
50mm x 4.6mm（保护柱）	5	250	201250-4605
150mm x 4.6mm 250mm x 4.6mm 300mm x 4.6mm	5 5 5	250 250 250	201250-4615 201250-4625 201250-4630
50mm x 7.8mm（保护柱）	5	250	201250-7805
150mm x 7.8mm 250mm x 7.8mm 300mm x 7.8mm	5 5 5	250 250 250	201250-7815 201250-7825 201250-7830
50mm x 4.6mm（保护柱）	10	250	203250-4605
300mm x 4.6mm	10	250	203250-4630
50mm x 7.8mm（保护柱）	10	250	203250-7805
300mm x 7.8mm	10	250	203250-7830

Nanofilm SEC-500分析柱

长度x内径	粒径 (µm)	孔径 (Å)	订货号
50mm x 4.6mm（保护柱）	5	450	201500-4605
150mm x 4.6mm 250mm x 4.6mm 300mm x 4.6mm	5 5 5	450 450 450	201500-4615 201500-4625 201500-4630
50mm x 7.8mm（保护柱）	5	450	201500-7805
150mm x 7.8mm 250mm x 7.8mm 300mm x 7.8mm	5 5 5	450 450 450	201500-7815 201500-7825 201500-7830
50mm x 4.6mm（保护柱）	10	450	203500-4605
300mm x 4.6mm	10	450	203500-4630
50mm x 7.8mm（保护柱）	10	450	203500-7805
300mm x 7.8mm	10	450	203500-7830

Nanofilm SEC-1000分析柱

长度x内径	粒径 (µm)	孔径 (Å)	订货号
50mm x 4.6mm（保护柱）	5	950	201950-4605
150mm x 4.6mm 250mm x 4.6mm 300mm x 4.6mm	5 5 5	950 950 950	201950-4615 201950-4625 201950-4630
50mm x 7.8mm（保护柱）	5	950	201950-7805
150mm x 7.8mm 250mm x 7.8mm 300mm x 7.8mm	5 5 5	950 950 950	201950-7815 201950-7825 201950-7830
50mm x 4.6mm（保护柱）	10	950	203950-4605
300mm x 4.6mm	10	950	203950-4630
50mm x 7.8mm（保护柱）	10	950	203950-7805
300mm x 7.8mm	10	950	203950-7830

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